2009年5月17日 星期日

FPLC AND HPLC的差別

HPLC 是高效率液態層析儀,
你可以想像一般的管柱層析,只不過以高壓高流速來粹取,
優點是可回收樣品,注入的樣品量較少,分離樣品快速,
但這些都是針對在一般分析時的需求,
如果是針對需要回收樣品的話,它的量太少,需要多次分離,
雖然最近有可以一次打幾個mg的管柱出現,用於分離較低分子量的peptide,
例如我剛合成一段peptide,但可能不是很乾淨,
此時便可使用HPLC來分離出我需要的樣品。

FPLC 是快速液態層析儀,
其實其原理跟HPLC差不多,一樣是用pump來加壓加速分離的,
但它的管柱和HPLC不一樣,其管柱外殼一律是用塑膠材質,
故使用的壓力與流速,便不像HPLC那麼強,(哪種塑膠我就不知道囉)
它主要是用來分離蛋白質用的,可以分離的量也較大,
很多人一定會覺得奇怪,用HPLC也是一樣的呀,為何一定要用FPLC呢??
這是因為蛋白質可能會跟HPLC的金屬管壁鍵結(bind)在一起,
如此就得不到所要的蛋白質了,
且蛋白質也可能因為高壓而變性,也是得不到想要的蛋白質,

價格上HPLC較便宜,大概30萬就能買到不錯的了...
而FPLC就要很多錢囉,而且台灣這邊只有一個香港商的安法瑪亞在代理,
貴死囉,我實驗室那一台沒有電腦連線的好像就要五十萬吧,型號我忘了,
在維修上呢,HPLC較FPLC簡單(找人來一下子就解決了),FPLC常出問題,
一下子O ring老化要換,一下子pump的酒精不夠要加,
而當過壓的情形太常發生時,就代表著過濾部份的membrane要換了...
煩的呢...