2009年5月14日 星期四

ELISA 血清分析

1. 將100μl/well antibody coated入 HB plate中央60 wells內。蓋上蓋子,
以溼紙巾包裹,置入夾鏈袋中,於37℃ 1hr/4℃ overnight/RT 2hr。
ps:使用PBS or Coating buffer將血清以1:200~1:3200、4G2抗體以1:1000 稀釋

2.使用PBST buffer 洗五次。

3.使用300μl Block Buffer 固定well,立即移除溶液。

4.乾燥plate

5.加入100μl/well 百倍稀釋的antigen,於4℃ overnight
-----------------------------隔天------------------
1.使用PBST洗五次
2.加入100μl/well 1:1000 6B6C-1-HRP 溶於5%牛奶中
3.加入100μl/well 1:100/200/400/800/1600 ANTI-JEV SERUM,於37℃ 1hr
4.洗plate(1,2) 10次,加入100μl/well substrate,室溫反應十分鐘後,加入50μl
2N H2SO4停止反應。
5.洗plate(3) 5次,加入1:1000稀釋(in 5% milk)的IgG HRP-conjugate,於37℃ 1hr
6.洗plate(3) 10次,加入100μl/well substrate,室溫反應十分鐘後,加入50μl
2N H2SO4停止反應。

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