Plaque assay 病毒斑測試

1.將BHK21稀釋成4x10(四次方)個細胞/ml，取4ml/well種入6孔培養盤，
約一天半可形成單層細胞。BHK21要留一點在Flask內繼續養。
2.以48孔培養盤進行病毒液稀釋，以十倍稀釋病毒液6~8次(50μl病毒液溶於450μl內。)
3.倒除預先準備好的六孔培養盤中的培養液，並加入200μl的病毒稀釋液，放置於37℃，
Co2培養箱內感染一小時，感染期間每20分鐘搖晃一次，不可讓細胞乾掉，使病毒液均
勻覆蓋及感染。
4.感染一小時候，吸除六孔培養盤內的病毒液，加入4ml/well甲基纖維素培養液(0.5L
2.2% methylcellulose (Sigma,USA)，5% FCS，50% MEM)
5.培養至出現病毒斑後(通常日本腦炎約3～4天、登革病毒約六～七天)，以10%福馬林-酒
精溶液(Wako,Japan)固定(1 ml/well)一小時。
6.倒掉六孔培養盤內的液體，加入0.5%結晶紫(crystal violet)進行細胞染色(1ml/well)
可以均勻分布即可，染色時間六小時(overnight)。
7.自來水清洗，計算病毒斑數量。