2009年5月14日 星期四

quantitative/semi-quantitative RT-PCR

絕對定量(absolute quantitation)要先用已知濃度的相同東西做出一條standard curve
(如果要測total RNA,就用已知濃度的total RNA做standard curve)
利用內插法求你的sample濃度
當然,PCR本身的一些細節條件如saturation的事情就不在這裡討論

至於半定量(semi-quantitation)則是利用一個大家都有,而且量差不多的東西
(像是house keeping gene)當作分母一樣的東西
在相同反應條件下,每一個sample都跟分母比後再做比較

你如果要問quantitative PCR,不知道是不是要問real-time quantitative PCR?
如果是的話,基本上它也分成absolute/semi quantitative
只是偵測的方式跟傳統run gel的方式不一樣,
它可以偵測到PCR的gerometric phase,這是PCR當中最符合y=2^n的時期
所以可以避開saturation的問題

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