TA cloning

2X Rapid ligation buffer(使用前先Vortex) 5μl
PGEM-T Vector 1μl
PCR product 2μl
T4 ligase 1μl
D.D H2O 1μl(與PCR product合起來3μl即可)
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10μl

1.TA Sample 10μl+100μl comptent cells
↓ on ice 30 min
↓ 42℃ 2min
↓ on ice 2 min
2.加入400μl LB Medium
↓ 37℃ 1 Hr
3.加入75μl IPTG + 75μl X-gal
↓ Mix cell
4.塗plate (Sample 名、日期),1盤200μl

5.37℃ overnight (不可超過16Hrs)
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挑藍白菌
1.取新plate，分20格。
2.將菌挑到新plate中，用滅菌棒劃菌。(藍菌挑兩個當Control)
3.37℃ overnight
4.用木棒挑一半Clony 插入eppendoff內，靜置15分鐘，攪拌。
(eppendoff要先加Lysis buffer，100μl/eppdoff)
(剩下的冰冰箱(4℃)，之後可抽質體)
5.攪拌成黏稠狀，丟棄木棒。
6.每管90μl phenol-chrolform mix well 離心12000 rpm,5 min
7.抽上層DNA 取8μl run gel(100volt 30 min)
Marker使用1kb，plasmid 為4kb圓型會run到2 kb的位置。